優(yōu)良的菌種是保證大豆根瘤菌劑增產(chǎn)的前提。優(yōu)良的菌種應(yīng)具備共生固氮效率高，與土著根瘤菌競(jìng)爭(zhēng)能力、抗逆性和適應(yīng)性強(qiáng)等特性。大豆根瘤菌菌種是從大豆根瘤中分離、純化和篩選出來(lái)的。為提高菌種的性能，還可以采用新技術(shù)進(jìn)行育種，以期得到更好的菌株。
①根瘤的采集和分離 挖取帶有根瘤的根系，裝入塑料袋內(nèi)以備分離根瘤菌。用流水反復(fù)沖洗根瘤，直至無(wú)附著土壤，吸干水分。在無(wú)菌室內(nèi)將根瘤置入75%酒精中浸3～5min，然后移到0.1%升汞中消毒3～5min，再用無(wú)菌水沖洗根瘤，除去殘存的消毒液。切開(kāi)根瘤，用接種環(huán)直接蘸取瘤汁在剛果紅YMA平板上劃線。從根瘤中分離根瘤菌的培養(yǎng)基為酵母甘露醇瓊脂，簡(jiǎn)稱YMA。培養(yǎng)基成分為：磷酸氫二鉀0.5g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.lg，甘露醇10g，酵母膏l(xiāng)g，瓊脂18～20g，水l000mL。高壓滅菌(1kg/cm2) 30min。剛果紅瓊脂配方：在1000mLYMA培養(yǎng)基中加入1%剛果紅溶液2.5mL。剛果紅可在分裝試管前加入，也可以在溶化的培養(yǎng)基中加入滅菌的剛果紅溶液。
②初步鑒定 由根瘤里分離出的培養(yǎng)物，在剛果紅YMA平板上做初步鑒定，以確定是否是根瘤菌。根瘤菌菌落特征為：菌落黏稠，乳白色，在剛果紅YMA平板上不吸色或早期不吸色，而其他雜菌則易吸色。28～30℃恒溫培養(yǎng)，快生型大豆根瘤菌3～5d菌苔豐滿；慢生型大豆根瘤菌則需5～7d。選取典型菌落在剛果紅瓊脂平板上進(jìn)一步劃線純化。純化后的菌種進(jìn)行編號(hào)登記，并記錄所分離的大豆品種、土壤、分離日期和分離人等，然后移入YMA斜面培養(yǎng)后4℃冰箱保存。
